У цій частині франшизи про Індіану Джонса доктор Джонс шукає Святий Грааль - чашу, з якої Ісус пив на Тайній вечері, - перш ніж вона потрапить до рук нацистів. Він об'єднується зі своїм батьком, який живе окремо, але також є експертом з історії Грааля, і вони вирушають у пригоду, яка веде їх від катакомб Венеції до пустель Близького Сходу. По дорозі вони стикаються з древніми загадками, підступними пастками і несподіваними союзниками, намагаючись перехитрити нацистів і не дати їм використати Грааль у своїх зловісних цілях. Зрештою, Індіана Джонс повинен пройти останнє, смертельне випробування, щоб заволодіти Граалем і врятувати світ.