"Брати Блюз" - це гостросюжетна музична комедія, що розповідає про пригоди Джейка та Елвуда, двох братів, які виконують місію від Бога. Вийшовши з в'язниці, вони дізнаються, що їхній дитячий будинок знаходиться під загрозою закриття через значні борги. Щоб врятувати його, вони вирушають у дику подорож через всю країну, возз'єднуючи свою стару групу і залишаючи по собі хаос.
Намагаючись зібрати колишніх учасників гурту, дует переслідує поліція, а також мстивий кантрі-гурт, якому вони завдали кривди. По дорозі вони зустрічають таємничу жінку на ім'я Морін, яка закохується в Джейка, що додає їм ще більше клопоту. Незважаючи на перешкоди, Джейк та Елвуд сповнені рішучості влаштувати масштабний благодійний концерт, щоб зібрати необхідні кошти.
Їхня місія приводить їх до різних квінтесенційних місць Чикаго, таких як знамениті блюзові клуби та ресторани соул-фуд, де подають найрізноманітнішу їжу. По дорозі вони залучають легендарних музикантів та виконавців, серед яких Рей Чарльз, Арета Франклін та Джеймс Браун. Енергійні музичні виступи стають серцем і душею їхньої подорожі.
Брати змагаються з часом, їм доводиться тікати не лише від поліції та розлюченого кантрі-гурту, але й від таємничої сили, яка, схоже, вирішила зупинити їх за будь-яку ціну. Завдяки своєму міцному зв'язку та непохитній вірі в силу музики, Джейк та Елвуд намагаються врятувати сиротинець, водночас приймаючи своє справжнє покликання - Братів Блюз".